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Para poder entender este tema daremos una pequeña reseña del microscopio.

El instrumento que fue empleado por los primeros biólogos para estudiar la célula y los tejidos, es el microscopio. El nombre deriva etimológicamente de dos raíces griegas: mikrós, que significa pequeño y skopéoo, que significa observar. Es decir el microscopio es un instrumento que sirve para observar objetos o estructuras pequeñas.

En 1670,  Roberto   Hooke  diseñó uno de los microscopios más elegantes de esta época, el cual ilustra su tratado“Micrographia”,uno de los primeros documentos sobre microscopia e imagen.

Antoni van Leewenhoek, fue un comerciante de telas, quien se dedicaba  a tallar lentes,  convirtiéndose en un científico aficionado. El fue  la primera persona que pudo observar a las

bacteriascon un microscopio simple, organismos que no habían sido vistos con los microscopios  compuestos de la época que no tenían el poder

Existen dos tipos de microscopios que emplean la luz como fuente de energía para formar imágenes aumentadas y detalladas de objetos que a simple vista no es posible observar:

El microscopio simple o lupa es un instrumento de amplificación de imágenes que consiste en la utilización de una o más lentes convergentes en un solo sistema óptico. Dependiendo de la curvatura de la superficie de la(s) lente(s) las lupas pueden ampliar las imágenes de los objetos desde 5, 8,10, 12, 20 y hasta 50 veces. Forman una imagen de mayor tamaño, derecha y virtual.


Los microscopios fotónicos compuestos que se emplean actualmente tienen sus antecesores en los instrumentos ópticos desarrollados, en el periodo comprendido entre 1590 y 1610, por Hans (padre) y Zacarías (hijo) Janssen; quienes mediante el tallado cuidadoso de lentes biconvexas construyeron los primeros microscopios compuestos

PARTES DE UN MICROSCOPIO

COMPONENTES DEL MICROSCOPIO FOTÓNICO. El microscopio fotónico compuesto esta integrado por tres tipos de componentes:

COMPONENTES MECÁNICOS
: Son aquellos que sirven de sostén, movimiento y sujeción de los sistemas ópticos y de iluminación así como de los objetos que se van a observar. Éstos se muestran en la imagen del microscopio

COMPONENTES ÓPTICOS:
Son los objetivos, los oculares, el condensador y los prismas. Los tres primeros están constituidos por sistemas de lentes positivos y negativos.

FORMACIÓN DE LA IMAGEN A TRAVÉS DEL MICROSCOPIO FOTÓNICO

La imagen total del microscopio fotónico se forma mediante las imágenes que generan sucesivamente el objetivo y el ocular. Para que se forme una imagen del objeto observado es indispensable que por lo menos dos rayos luminosos que inciden en el objeto iluminen una porción del mismo.

El microscopio fotónico

Tiene una capacidad máxima de mostrar detalles de la imagen de un objeto (poder de resolución), cuando entre ellos existe una distancia aproximada de 0.2 de micrómetro. Este tipo de microscopio es incapaz de ofrecer un poder de resolución mayor porque existen dos factores limitantes: la longitud de onda () de la energía luminosa utilizada y la apertura numérica (A.N.) de la lente del objetivo.

Tipos de microscopio	Características de la imagen	Uso principal
Campo claro	Las estructuras (células, microorganismos, etc.) aparecen iluminadas sobre un fondo, también iluminado.	Observación de muestras teñidas (es el más usado en las observaciones de rutina).
Campo oscuro	Se observan las estructuras iluminadas sobre un fondo oscuro (negro)	Observación de células sin teñir detención de cristales en muestras de orina identificación de algunos microorganismos como el treponema pallidum.
Contraste de fases	La imagen de las estructuras se observa en diferentes tonos de claro y oscuro; el fondo aparece poco iluminado.	Es el microscopio más usado para observar células y tejidos no teñidos; es de especial utilidad para estudiar células vivas.
Fluorescencia	La imagen muestra las zonas que se han marcado con el colorante fluorescente como zonas o puntos brillantes, frecuentemente en tonos amarillo, verde o rojo.	Se emplea para detectar compuestos fluorescentes que se hallen en los tejidos o más frecuentemente para detectar la marca fluorescente en muestras procesadas con la técnica de inmunofluorescencia.
Luz polarizada	La imagen aparece en tonos claros y oscuros, o en el caso de cristales aparecen brillantes.	Permite distinguir zonas isótropas  no cambian el plano de vibración de la luz polarizada; de las anisótropas si lo cambian
Interferencia de Nomarsky	Imágenes en relieve de las muestras.	Se pueden observar muestras teñidas o no y evaluar las características de sus superficies.
Interferencia de Jamin Lebedeff	Imágenes en color de muestras no teñidas.	Se utiliza para el análisis de la composición o el peso celular es de uso limitado
Laser confocal	Muestras teñidas y no teñidas	Se utiliza para obtener cortes ópticos muy delgados hacer reconstrucciones tridimensionales a partir  de una serie de imágenes individuales.
Estereoscópico	Imágenes tridimensionales amplificadas de muestras gruesas.	Fragmentos de órganos u órganos completos, auxiliar en la disección de estructuras pequeñas.

CAMPO CLARO

Un microscopio es un instrumento que permite observar estructuras pequeñas.

Este es un corte de lengua teñido con tricrómico de Gomori. Para observar contraste de estructuras, con el microscopio fotónico de iluminación común usamos generalmente colorantes

Si bien el microscopio fotónico no nos permite apreciar el detalle ultraestructural del retículo endoplásmicorugoso, la tinción basófiladel citoplasma con H y E nos permite identificar su presencia. Páncreas.

CAMPO OBSCURO

El método más antiguo y fácil de realizar es el llamado sistema de campo obscuro. Estas son células de descamación de mucosa oral. Observe que sus componentes se ven blancos, mientras que el fondo es completamente negro.

CONTRASTE DE FASES

Frotis sanguíneo en fresco observado con contraste de fases. No olvide el halo o brillo claro. Estos son eritrocitos.

Estos son macrófagos observados con el sistema de contraste de fases. El halo claro brillante es evidente

FLUORESCENCIA

El microscopio de fluorescencia equipado con un sistema óptico especial es indispensable para la observación de las técnicas de inmunofluorescencia



LUZ POLARIZADA

Este es hueso en el que se identifican las osteonas. Note el intenso brillo en diversos colores. En realidad en esta imagen tomada con luz polarizada, el Dr. Joaquín Carrillo agregó colores de difracción.

Este es un corte de músculo esquelético, previamente teñido y observado con luz polarizada. Observe el intenso brillo de las bandas transversales (anisótropas).

INTERFERENCIA DE NOMARSKY

Frotis sanguíneo observado con interferencia diferencial según Nomarski. Se identifican eritrocitos y dos leucocitos. Observe que uno tiene gránulos gruesos y núcleo bilobulado (eosinófilo), mientras que otro tiene gránulos finos (neutrófilo).

INTERFERENCIA DE JAMIN LEBEDEFF

Un sistema de interferencia diferencial que en su tiempo fue muy empleado, es el de Jamin-Lebedeff. En esta y las siguientes imágenes vemos las mismas células de descamación de mucosa oral con colores brillantes que van cambiando.